Вид документа : Статья из журнала Шифр издания : Автор(ы) : Алексеева А. А., Петров А. С., Федорчук В. В., Федорчук Е. А., Осипова Т. А., Тишков В. И. Заглавие : Изменение величины изоэлектрической точки формиатдегидрогеназы методом рационального дизайна Место публикации : Вестник Московского университета. Сер. 2, Химия. - 2014. - Т. 55, № 2. - С.98-105: рис., табл. - ISSN 0201-7385 (Шифр В43/2014/2). - ISSN 0201-7385 Примечания : Библиогр.: c. 104-105 (12 назв. ) УДК : 577.1 ББК : 28.072 Предметные рубрики: Биология Общая биохимия Ключевые слова (''Своб.индексиров.''): pseudomonas sp. 101--аминокислотные замены--белковая инженерия--изоэлектрическая точка--рациональный дизайн--формиатдегидрогеназа Аннотация: Для расширения рН-оптимума стабильности NAD +-зависимой формиатдегидрогеназы (ФДГ, КФ 1. 2. 1. 2) из бактерии Pseudomonas sp 101 (PseФДГ) методом направленного мутагенеза получены четыре мутантных фермента с заменами Lys112Pro, Lys231Ala, Lys231Ser и Lys317Asn. Выбор положений и тип аминокислоты для замены был сделан на основе выравнивания аминокислотных последовательностей ФДГ из разных источников, а также анализа трехмерной структуры PseФДГ. Для всех полученных мутантных форм проведено изучение кинетических свойств и температурной стабильности. Показано, что замены в положениях 112 и 231 приводят к небольшому улучшению кинетических свойств, в то время как для мутанта Lys317Asn наблюдалось снижение сродства к коферменту. Изучение температурной стабильности полученных ферментов показало, что замены в положениях 112 и 231 приводят лишь к небольшой дестабилизации фермента, а замена Lys317Asn вызывает значительную потерю в термостабильности. Для всех полученных мутантных форм наблюдалось снижение изоэлектрической точки примерно на 0, 1 единицу. Держатели документа: Тюменская ОНБ : ул. Орджоникидзе, 59 Доп. точки доступа: Алексеева, А. А. Петров, А. С. Федорчук, В. В. Федорчук, Е. А. Осипова, Т. А. Тишков, В. И.